BRONXIAL ASTMALI UŞAQLARDA LOKAL VƏ SISTEM IMMUNITETININ ƏSAS GÖSTƏRICILƏRININ KLINIKI-DIAGNOTIK ƏHƏMIYYƏTI

10-04-2009

Бронхиальная астма (БА) является одним из самых распространенных заболеваний детского возраста. Известно, что в основе патогенеза БА важное значение имеют иммунологические механизмы. В отличие от системных изменений, исследованию которых посвящено много работ, особенностям местного иммунитета при БА уделяется гораздо меньше внимания исследователей [1]. В то же время патогенетически значимые отклонения происходят именно на топическом уровне.

В небольшом числе публикаций отмечено, что местный иммунитет ротовой полости взаимосвязан с глубиной патологии на местном органном уровне [2]. В отличие от хорошо изученной сыворотки крови, состав слюны стал предметом рассмотрения только в последние годы. Исследователями показана высокая информативность и обоснована перспективность изучения секреторного иммунитета для целей экологического мониторинга здоровья детей [3]. 

В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы было: изучить клинико-диагностические особенности  основных показателей системного и локального иммунитета у детей с бронхиальной астмой. 

Материалы и методы: Под нашим наблюдением находилось 153 ребенка, из них 83 ребенка с БА, 50 детей с РБ и 20 практически здоровых ребенка в возрасте от 4 до 15 лет, которые были включены в исследование методом случайного выбора.

Исследования проводились в периоде ремиссии заболеваний на базе кафедры педиатрии АзГИУВ им. А.Алиева, детских городских поликлиник № 2, 5, 10, 13 г.Баку и медицинского центра «Евромед» в период с 2006 по 2009 гг.

Для исследования показателей иммунной системы использована кровь и слюна, взятые у детей натощак, не ранее чем через 1 месяц после окончания любого инфекционного процесса или ревакцинации. В крови и слюне определены следующие показатели: уровни иммуноглобулинов (sIgA, IgA, IgE, IgG, IgM), ЦИК, зрелые (CD3) Т-лимфоциты, хелперные (CD4), супрессорные Т-лимфоциты (цитотоксические CD8), количество В-клеток (СD19), NK-лимфоциты (CD56), активированные лимфоциты - апоптоз клеток (CD95). Использовали методику, прилагаемую к данной панели моноклональных антител. Микроскопию проводили на микроскопе фирмы «Люмам РI». Определение уровня IgE  в смешанной слюне проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью набора «Е-ИФА- Бест стрип» на аппарате Bio Screen MS-500.

Результаты и обсуждение: С целью изучения интенсивности иммунных реакций у детей были проанализированы показатели клеточного и гуморального иммунитета для каждой группы обследуемых. В таблице 1 приведены данные сравнительного анализа показателей Т-клеточного звена иммунного статуса у детей с БА и РБ по сравнению с группой контроля. При анализе показателей иммунного статуса больных БА и рб установлены изменения в фенотипе Т-клеток в сравнении с группой здоровых детей.

Так, общее число Т-лимфоцитов (СD3) было значительно снижено (55±9,4; р < 0,05), в группе детей с БА, что отражает дефицит Т-клеточных механизмов защиты, осуществляющими иммунологический надзор за антигенным гомеостазом в организме. Подсчет относительного числа Т-хелперов (СD4) показал также (38±7,97; р < 0,05) снижение данной субпопуляции Т-лимфоцитов у детей с БА. Анализ уровня Т-супрессоров (СD8) выявил тенденцию к их незначительному снижению (28,6±8,96; р>0,05) хотя разница оказалась не достоверной.

 

Таблица 1

Показатели Т-клеточного звена иммунного статуса в периферической крови

у  детей с БА и РБ

Показатели (%)

         БА (n=83)        

РБ (n=34)

Здоровые дети (n=20)

СD3

55±9,4*

59±3,4

62,5±5,1

СD4

38±7,97*

40,44±5,81*

42,5±9,3

СD8

28,6±8,96

30,06±6,59

30,75±8,0

СD4/ СD8

1,32±0,38

1,36±0,05

1,38±0,13

СD56

24,5±9,29*

10,75±7,69*

19,33±8,02

Примечание: * - р < 0,05

 

Количество недифференцированных «нулевых» лимфоцитов (СД56) у детей с БА превышало аналогичные значения в группе контроля (24,5±9,29 против 19,33±8,02; р<0,05). Повышение данного показателя свидетельствует о напряженности противовирусного иммунитета у детей с БА. В то время  как в группе детей с РБ данный показатель оказался значительно сниженным (10,75±7,69; p<0,05), что может свидетельствовать о недостаточности противовирусного иммунитета.

При исследовании гуморальных факторов иммунного статуса у детей с БА были выявлены некоторые отклонения по сравнению с контрольной группой (см.табл. 2).

 

Таблица 2

Показатели гуморального звена иммунитета и ЦИК в периферической крови у 

 детей с БА и РБ

Показатели (%)

БА (n=83)

РБ (n=34 )

Здоровые дети (n=20)

СD19

26,33±7,09

24,8±5,7

24,3±6,7

IgA(g/l)

1,91 ±1,11*

1,5±0,45

1,4±0,25

IgM(g/l)

0,97±0,1

1,21±1,85

1,27±1,48

IgG(g/l)

10,2±1,06

12,2±2,71

13,2±1,07

IgЕ(g/l)

369,64±180,5*

65,2±37,6

35,2±5,6

ЦИК

66,6±16,8*

48,25±19,4

41,25±16,8

Примечание: * - р < 0,05

Как видно из таблицы, количество В-лимфоцитов (СД19) у больных несколько превышало соответствующий показатель в контроле (26,33±7,09 против 24,3±6,7; р > 0,05).

Важное значение в оценке гуморального иммунитета имеет соотношение популяций в общем пуле В-лимфоцитов. У обследуемых детей была установлена дисиммуноглобулинемия: снижение IgM и IgG и повышение IgA. повышение содержания IgA на фоне сниженных показателей Т-звена иммунитета, вероятно, является компенсаторным, отражая поликлониальную активацию В-системы иммунитета.  У больных с БА также отмечалось возрастание количества ЦИК (66,6±16,8 против 41,25±16,8; р < 0,05).

Типичным для детей с БА была тенденция к снижению показателей Т-клеточного звена иммунитета за счет угнетения показателей: CD3-71%; CD4-64%; CD8-34%; СD56-56%; СD95-69% больных. Снижение количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций характеризовало недостаточность клеточного звена иммунитета и уменьшение резистентности организма  к вирусной инфекции. При этом В-лимфоциты (СD19) у 37% детей с БА имели тенденцию к повышению. По показателям гуморального иммунного ответа группы детей с РБ достоверно не отличались от контрольной группы. Проведенный корреляционный анализ между уровнем СD95 и лимфоцитами периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56) приведен в таблице 3.

Слабые корреляционные зависимости между лимфоцитами крови и уровнем СD95 маркера апоптоза у детей с БА по сравнению с детьми с РБ  могут быть связаны как с присоединением сенсибилизации к пищевым, бытовым и эпидермальным аллергенам, так и с включением разных механизмов апоптоза. Полученный факт подтверждает существующее мнение об отсутствии единых механизмов запуска апоптоза при развитии заболеваний разных нозологических групп [1,5].

Таблица 3

Коэффициент корреляции между уровнем СD95-маркером апоптоза и лимфоцитами периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56)

 

Показатель

СD95

БА

РБ

СD3

0,3

-0,45

СD4

0,12

- 0,16

СD8

0,26

0,45

СD19

- 0,09

0,9

СD56

0,46

0,51

Для изучения интенсивности иммунных реакций на местном уровне все дети с БА были подразделены на 2 группы: первая группа с уровнем IgE>100 IU/ml; вторая группа с уровнем IgE

Как видно из таблицы, все показатели Т-клеточного иммунитета имели положительную зависимостью.  При этом наиболее значимые положительные связи были обнаружены между показателями СД3 и СД8 (ρ=+0,54 и ρ=+0,59; р<0,001).

При исследовании гуморального иммунитета в крови и слюне показатели В-клеток (СД19) имели отрицательную корреляцию (-0,31). Однако при сравнении показателей иммуноглобулинов были обнаружены разной силы положительные связи. Наиболее информативным показателем с высоким уровнем корреляции (ρ=+0,87; р<0,001) оказался IgE, что подтверждает целесообразность его определения в слюне детей с БА. Наши данные подтверждают общепризнанное мнение, что IgE обладает способностью к быстрой фиксации на клетках слизистых оболочек, поэтому в свободном виде присутствует в плазме крови в ничтожных количествах [4,5]. Между показателями сывороточного и секреторного IgA была обнаружена средней силы положительная связь (ρ=+0,31; р<0,001). Как известно [5], локальный синтез  IgA обуславливает местный иммунитет, осуществляя тем самым защиту слизистых оболочек от патогенных микроорганизмов и потенциальных аллергенов. Содержание ЦИК в крови и слюне имело обратную зависимость средней силы (ρ=-0,42; р<0,001).

Таблица 4

Показатели клеточного иммунитета в периферической крови и слюне  детей с БА и их корреляция

Показатели

В крови

(n=83)

В слюне

(n=83)

Уровень

корреляции

СД3

55±9,4

3,63±0,74

+0,54

СД4

38±7,97

2,63±1,18

+0,33

СД8

28,6±8,96

2,0±1,06

+0,59

СD4/ СD8

1,32±0,38

1,31±0,23

--

СД56

24,5±9,29

2,0±1,19

+0,36

 

Таблица 5

Показатели гуморального иммунитета и ЦИК в периферической крови и слюне детей с БА

Показатели

            В крови

(n=83)

 В слюне

(n=83)

Уровень корреляции

СД19

26,33±7,09

1,75±0,7

-0,31

IgA(g/l)

1,91 ±1,11

0,39±0,2

+0,31

IgM(g/l)

0,97±0,1

1,49±0,83

+0,06

IgG(g/l)

10,2±1,06

2,3±0,48

+0,25

IgE(g/l)

369,64±180,5

1,05±0,4

+0,87

ЦИК (ед.опт.пл.)

66,6±16,8

11,64±9,6

-0,42

Состояние локального иммунного статуса оценивалось также по результатам исследования клеточного и гуморального иммунитета индексной оценкой: СД3/СД19; СД3/СД4; СД3/СД8; СД4/СД8; IgG/CД19; IgA/CД19; IgE/CД19; IgG/IgA; IgA/IgM; IgG/IgM; IgE/IgG; IgG/ ЦИК; IgA/ ЦИК; IgM/ ЦИК; IgE/ ЦИК (см. табл. 6 и 7).

Таблица 6

 

Индексная оценка клеточного иммунитета в обследуемых группах детей с IgE- позитивным и IgE- негативным ответом

Группы больных

IgE>100

(n=63)

IgЕ<100

(n=20)

СД3/СД19

2,4

2,3

СД3/СД4

1,4

2,7

СД3/СД8

2,7

2,1

СД4/СД8

1,9

0,9

Сумма

8,4

8,0

 

Как видно из данных таблиц, в первой группе больных отмечалось сниже-ние локальных клеточных параметров (суммарная индексная оценка составляла 8,4) относительно гуморальных индексных показателей (суммарная индексная оценка – 10,7). Во второй группе больных такой разницы не отмечалось (индексная оценка клеточных факторов – 8,0, а гуморальных- 7,9). Создается впечатление, что у больных второй группы не наблюдается дисбаланса между клеточными и гуморальными факторами иммунитета. У больных первой группы отмечается напряженность гуморальных иммунных реакций, что выражается высокой индексной оценкой – 10,7. Чтобы исключить влияние высоких значений IgE в группе больных с IgE – позитивным ответом из суммарной оценки исключили индексы, связанные с IgE. Полученные данные составили для первой группы 8,8, а для второй – 7,2, т.е. статистические данные отражали активность гуморальных реакций в первой группе обследуемых детей.

При повышении содержания в периферической крови уровня общего IgE происходило уменьшение уровня СD95 клеток. Во II группе пациентов установлено (р<0,01) снижение количества СД95 клеток и уровня экспрессии на них Fas- рецептора (31,9±3,2%) относительно детей I группы (57,7±8,42%).

 

Таблица 7

 

Индексная оценка гуморального иммунитета в обследуемых группах детей с IgE- позитивным и IgE- негативным ответом

 

Группы больных

IgE>100

(n=63)

IgЕ< 100

(n=20)

IgG/CД19

0,7

1,5

IgА/CД19

0,3

0,3

IgМ/CД19

0,04

0,1

IgЕ/CД19

0,8

0,5

IgG/IgA

7,1

4,1

IgА/IgМ

0,4

0,1

IgG/IgМ

0

0,8

IgЕ/IgG

0,9

0,2

IgG/ ЦИК

0,2

0,2

IgА/ ЦИК

0,05

0,05

IgМ/ ЦИК

0

0

IgЕ/ ЦИК

0,2

0,06

Сумма

10,7

7,9

Возможно, это отражает процессы регуляции экспрессии Fas- рецептора со стороны цитокинов, продуцируемых Th2, что блокирует передачу сигналов апоптоза в клетки, в том числе и IgE- продуцирующие, и влечет за собой поддержание продукции IgE.  Результаты корреляционного анализа лимфоцитов периферической крови (СD3, СD4, СD8, СD19, СD56) и СD95- маркера апоптоза у детей с БА в зависимости от уровня  общего IgE представлены в таблице 8.

В отличие от I группы, во II группе больных выявлены положительные средние и сильные корреляционные связи между уровнем СD95 и лимфоцитами крови. Выявленная отрицательная корреляционная зависимость в обеих группах больных между концентрациями СD95 маркера апоптоза и IgE, может свидетельствовать об участии системы апоптоза в регуляции продукции общего IgE, происходящего в результате большей продолжительности жизни клеток, его образующих.

Таблица 8

Коэффициент корреляции лимфоцитов периферической крови и СD95- маркера апоптоза у детей с БА в зависимости от уровня  общего IgE

Показатель

CD95

IgE

IgE>100 МЕ/мл

CD 3

CD4

CD8

CD19

CD56

IgE

0,18

-0,2

-0,28

0.45

0,37

-0,64

0,54

0,76

0,43

0,4

0,78

-0,8

Выводы:

1.Сравнительный анализ пока-зателей гуморального и клеточного иммунитета в крови и слюне выявил наиболее значимые положи-тельные связи между показателями СД3 и СД8 (ρ=+0,54 и ρ=+0,59; р<0,001); уровнем  IgE (ρ=+0,87; р<0,001); между показателями сывороточного и секреторного IgA (ρ=+0,31; р<0,001); содержание ЦИК в крови и слюне имело обратную зависимость средней силы (ρ=-0,42; р<0,001). У детей с БА определение уровня IgE в секрете ротовой полости может быть использовано в качестве неинвазивного способа иммунологического обследования у детей различных возрастов.

2.В группе пациентов с БА ((46,0±21,8), р<0,01)) и  при сочетании БА и АД ((32,6±18,6), р<0,0001)) наблюдается достоверное снижение уровня СD95-маркера апоптоза лимфоцитов в сыворотке крови по сравнению с контролем (59,8±9,6).У детей с РБ существенных отличий от контрольной группы по указанному показателю не выявлено ((56,7±8,0) и (59,8±9,6) соответственно). При этом обнаружена отрицательная корреляционная зависимость (ρ=-0,8) между концентрациями СD95- маркера апоптоза и IgE, что может свидетельствовать об участии системы апоптоза в регуляции продукции общего IgE. С целью дифференциальной диагностики БА и РБ наряду с анализом клинико-анамнестических данных и аллергологическим обследованием целесообразно определение   показателя уровня СД95-маркера апоп-тоза лимфоцитов в сыворотке крови.

 

ƏDƏBİYYAT - ЛИТЕРАТУРА REFERENCES:

 

1. Абаджиди М. А., Лукушкина Е. Ф.и др. Уровень цитокинов в секрете ротовой полости у детей с бронхиальной астмой. Цитокины и воспаление,  2002, № 3; с.15-19.

2. Богданова А.В., Бойцова Е.В. и др. Особенности местного воспаления при тяжелой бронхиальной астме и хроническом бронхиолите у детей. Педиатрия,  2005, № 4, с.8-11. 

3. Комарова Л.Г.,Алексеева О.П. Саливалогия – М.: Изд-во НГМА Нижний Новгород, 2006. -177с.

4. Медведева Л.В. Анализ показателей секреторного иммунитета у здоровых и склонных к бронхоспазму детей. Актуальные проблемы пульмонологии на Урале; Мат.IV Конгресса пульмонологов Уральского Федерального округа. г. Челябинск, 2004г. С. 41- 45.

5. Мельников О.Ф., Заболотный Д.И. Диагностика иммунодефицитов при патологии слизистой оболочки на основе определения иммуноглобулинов в секретах. – К.: Институт оториноларингологии им. Коломийченко АМН Украины, 2003. – 31 с.


Müəlliflər:
Ш.М. Рустамова

Digər jurnal və qəzetlər